1. 研究目的与意义
研究内容:1 建立非变性凝胶电泳的方法用于分离细胞的裂解（蛋白的混合物）；2 研究标准物质MTX（甲氨蝶呤）和蛋白DHFR（二氢叶酸还原酶）的结合；2.1 将非变性凝胶电泳应用于标准物质MTX和蛋白DHFR的结合；2.2 测定蛋白DHFR的含量，分析蛋白与标准物质的结合率；3 研究芫花酯甲和细胞裂解液的结合；3.1 芫花酯甲的提取；3.2 细胞裂解液的制备；3.3将非变性凝胶电泳应用于芫花酯甲和细胞裂解液的结合；3.4研究芫花酯甲与一个小分子蛋白的具体结合； 研究意义:目前生物蛋白质成分复杂，大部分药物对于蛋白质的具体作用迄今为止还不可知，研究蛋白药物技术，即药物与蛋白结合的知识和理论、药物和蛋白结合的研究方法进展、结合的机制等，将促进药物的药理研究，而非变性凝胶电泳技术是研究蛋白质复合体的强有力工具，并且非变性凝胶电泳电泳后的蛋白质仍保持其生物活性，电泳结果比较精确，精确到具体的蛋白质，在蛋白质分离的应用上发挥了很大的作用。
2. 文献综述
非变性凝胶电泳（Native-PAGE）在蛋白上的应用马维维（040011162中药资源与开发）摘要： 本文讲述了非凝胶电泳的原理特点、方法步骤以及它的优缺点和常见为题分析等方面，并结合蛋白质的特点，揭示了非凝胶电泳在蛋白质分离、鉴别和分析上有很多的应用。
关键词： 非变性凝胶电泳 蛋白 生物蛋白质成分复杂，大部分药物对于蛋白质的具体作用迄今为止还不可知，研究蛋白药物技术，即药物与蛋白结合的知识和理论、药物和蛋白结合的研究方法进展、结合的机制等，将促进药物的药理研究，而非变性凝胶电泳技术是研究蛋白质复合体的强有力工具，并且非变性凝胶电泳电泳后的蛋白质仍保持其生物活性，电泳结果比较精确，精确到具体的蛋白质，在蛋白质分离的应用上发挥了很大的作用，为此，本文综述了非变性凝胶电泳在蛋白质上的相关研究。
1.植物细胞蛋白在生命过程中多数生理功能并不是由单一蛋白质独立完成的，而是由一系列的蛋白质以复合体的形式通过蛋白质与蛋白质之间，或者蛋白质与基因的相互作用共同完成［1］，如光合作用［2］、细胞壁生成［3］、激素信号传导［4］和氧化还原反应等［5］。
3. 设计方案和技术路线
1.研究方法：1.1查阅相关文献掌握相关实验技术1.2 利用物质BSA掌握非变性凝胶电泳技术：研究配胶浓度、缓冲液浓度、PH等因素对非变性凝胶电技术电泳的影响，设计适宜的实验方案1.3用非变性凝胶电技术测定BSA的分子量1.4从芫花里提取蛋白芫花酯甲，考察提取溶剂浓度、PH值、温度等对芫花酯甲提取的影响1.5利用掌握的非变性凝胶电技术研究工具药（如MTX）与相关蛋白质的结合率1.6提取细胞裂解液，制定最适宜的提取方案1.7利用掌握的非变性凝胶电技术研究芫花酯甲与细胞裂解液中哪一种小分子蛋白结合以及他们的结合率2.技术路线：2.1 非变性凝胶电泳的应用电泳→切割凝胶→染色和脱色（在摇床上脱色至目的蛋白质条带清晰可见）→将未染色凝胶中含有目的蛋白质的部分切割→研磨凝胶至尽可能碎（所用器具需灭菌）后放置在4℃→仪器测定含量，算出得率2.2 植物蛋白的提取2.3 高效液相色谱和质谱联用技术
4. 工作计划
2022年1月：文献调研和实验方案的设计2022年2月－4月：做非变性凝胶电泳的相关实验以及分析讨论2022年5月－6月：分析评价并得出芫花酯甲与相应小分子蛋白的结合率
5. 难点与创新点
丙烯酰胺凝胶电泳可以在电泳过程中保持蛋白质的天然构象、亚基之间的作用及其生物活性，从而获得有活性的蛋白，有利于蛋白质的整体研究。
非变性聚丙烯酰氨凝胶电泳是以聚丙烯酰氨凝胶作为支持介质的电泳方法（凝胶中不加变性剂）。
这种介质既具有分子筛效应又具有静电效应，分辨力高于琼脂糖凝胶电泳，相差 1 个bp的DNA片段也可分开。
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