茶树CsCML7基因在非生物胁迫下的表达分析开题报告

 2023-02-15 10:12:18

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

我国是茶叶的源产地,有着悠久的品茶历史文化,茶在人们日常生活中起着重要作用。进入新世纪以来,我国茶园面积、茶叶产量、茶叶效益均呈现快速发展。随着人们对茶叶需求量的增加,茶树种植范围的不断扩大。但是受多种因素影响,茶树在原产地以外的地区种植时,非常容易受非生物胁迫影响而造成减产甚至死亡,导致茶叶大幅度减产,给茶叶生产带来危害。因此,研究茶树非生物胁迫下的表达诱导,对理解茶树的抗逆调控机制提供了重要的基础数据,对下一步提高茶树的抗逆性有重要的指导意义。

钙离子(Ca2 )是一种重要的第二信使, 参与调节植物的生长发育和对环境的适应。钙调素(CaM)和类钙调蛋白(CML)是一类最主要的Ca2 感受器, 虽然其自身没有催化活性, 但可通过调节下游靶蛋白的活性, 进而调控细胞的各种生理活动。基因芯片等基因表达数据表明, 很多CML 基因对各种非生物胁迫都有不同程度的响应,它们中有的受盐和干旱诱导,如拟南芥CML6, CML17,CML28, CML37, CML40,CML44 CML50 等;有的受盐和干旱抑制,CML8,CML13,CML18CML25 等;还有许多CML基因受多种非生物胁迫诱导,这些基因很可能在非生物胁迫情况下发挥重要作用。因此,对钙调素和类钙调蛋白的表达分析进行研究,有助于了解植物非生物胁迫下的调控机制,为提高作物非生物胁迫抗性提供帮助。

目前,国际上对于CaM的研究已渐趋成熟,而对于CML的研究则尚处于开始阶段。近年来,应用分子生物信息技术,在CML方面的研究已经取得了一些成果。水稻CML基因OsMSR2 也受多种非生物胁迫诱导, 而且过量表达OsMSR2 使转基因植物对ABA 的敏感性增强, 对盐和干旱的抗性也增强。水稻中另一个CML 基因CML4 也受盐和干旱诱导, 过量表达CML4 增强抗旱性。 启动子分析实验表明, 拟南芥CML37CML38 受盐、干旱、氧化胁迫和机械损伤诱导。此外, 拟南芥CML37, CML38CML39OsMSR2 同源, 因而它们也可能在非生物胁迫反应中发挥作用。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:

目前对于CML基因在非生物胁迫下表达的研究大多主要集中在模式植物上,本研究拟通过荧光定量测定分析茶树CML基因在非生物胁迫下的表达,为进一步研究茶树逆境生理和相关抗性育种提供参考。

研究内容:

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3. 研究的方法与方案

研究方法:

利用RT-PCR和RACE 方法克隆茶树中的CML基因全长cDNA,对所获得cDNA序列进行生物信息学分析。

进行序列分析之后,采用实时荧光定量PCR 的方法对获得的CML基因在非生物胁迫条件下的表达情况进行相关分析。

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4. 研究创新点

特色或创新之处:

目前对于CML基因的研究大多集中在模式植物上,本研究则选择从茶树着手,进行相关实验研究。实验中CML基因的克隆采用了RT-PCR和RACE 方法,选用了近年来新推出的试剂进行实时荧光定量PCR,结果更加精确可靠。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展

研究计划:

2016年10月进行采样,样品处理,提取总RNA;

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