1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
课题意义 水稻是人类的主要粮食产物,世界上近一半人口,都以大米为主食。
而由水稻黄单胞菌引起的水稻白叶枯病(Bacterial Leaf Blight, BB)和水稻细菌性条斑病(Bacterial Leaf Streak, BLS)是水稻上发病比较严重的两种细菌病害。
水稻黄单胞菌包括水稻细菌性条斑病菌(Xanthomonas. oryzae pv. oryzicola, Xoc)和水稻白叶枯病菌(Xanthomonas. oryzae pv. oryzae, Xoo)两个致病变种。
2. 研究的基本内容和问题
研究的目标本研究拟在研究二者之间有无联系,即水稻白叶枯病菌III型分泌系统关键基因的缺失是否会引起寄主植物气孔相关免疫反应的变化。
研究内容1.构建水稻白叶枯病菌PXO99A的hpa1基因单缺失突变体和hrpF基因单缺失突变体;2.用PXO99A、hpa1单缺失突变体和hrpF单缺失突变体菌株的细菌悬浮液喷施水稻日本晴植株,分别取不同时间叶片显微观察气孔开闭情况;3.用PXO99A、hpa1单缺失突变体和hrpF单缺失突变体菌株的细菌悬浮液喷施水稻日本晴植株,分别于6h、1d、3d取叶片磨碎涂布平板,约三天后统计单菌落个数,换算成细菌定殖量。
拟解决的关键问题水稻白叶枯病菌PXO99A侵染水稻时,植物气孔免疫反应会被激发以抵御病原菌的侵入。
3. 研究的方法与方案
研究方法利用同源重组双交换法构建基因敲除载体,电转法获得一次交换子,蔗糖压力筛选二次交换子即基因单缺失突变体,验证正确后用于后续表型实验。
用PXO99A、hpa1单缺失突变体和hrpF单缺失突变体菌株的细菌悬浮液喷施水稻日本晴植株,分别取不同时间叶片显微观察气孔开闭情况。
用PXO99A、hpa1单缺失突变体和hrpF单缺失突变体菌株的细菌悬浮液喷施水稻日本晴植株,分别于6h、1d、3d取叶片磨碎涂布平板,约三天后统计单菌落个数,换算成细菌定殖量。
4. 研究创新点
特色或创新之处植物病原菌的三型分泌系统在侵染寄主的过程中发挥重要作用,气孔免疫作为植物先天免疫系统的第一道屏障对应对病原菌侵染也发挥重要作用。
本研究拟在研究二者之间有无联系,即水稻白叶枯病菌三型分泌系统关键基因的缺失是否会引起寄主植物气孔相关免疫反应的变化。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展1、2017年9月:查阅文献2、2017年10月2017年11月:构建水稻白叶枯病菌PXO99A基因缺失突变体3、2017年12月2018年1月:种植水稻并进行一系列表型试验4、2018年3月2018年4月:整理结果和撰写论文
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