1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
1. 研究意义
禽流感(Avian Inf luenza ,AI) 是由A型禽流感病毒引起的一种家禽和野禽感染的急性接触性传染,该病被世界动物卫生组织(OIE)规定为A 类传染病,我国也将其列为一类动物疫病。本病自1878年在意大利首次报道以来, 不断蔓延,目前世界许多国家和地区均有本病的暴发和流行。每次禽流感暴发和流行尤其是高致病性禽流感(HPAI)的暴发和流行,都给养禽业造成了巨大的经济损失。禽流感病毒属于正粘病毒科(Orthomy xo viridae)流感病毒属, 根据血凝素HA 与神经氨基酸酶NA 的不同,可组成众多血清亚型流感病毒。迄今为止,在A 型流感病毒中,已鉴定的HA 亚型共有15 种为H1～H15 ;已鉴定的NA 亚型共有9种,为N1～N9。H5亚型AI 多为高致病性禽流感, 同时具有感染人的特征[1]。所以,建立特异、准确、敏感诊断禽流感的方法,成为迫在眉睫的问题, 也成为目前研究的热点。由于世界各地禽流感的暴发频率越来越高、流行面积越来越广,因而导致全球对它的高度关注。虽然各国对禽流感防止策略不尽相同, 但都把禽流感的快速诊断和及时监测作为首要步骤。在国际贸易中,对禽流感病毒( AIV )的检疫也成为各国进出口贸易的重点检测对象[2]。因此,快速、及时、准确地检测出禽流感对保障国民的生命财产安全具有重要意义。
由于禽流感病毒亚型众多,抗原性变异极快,毒株的致病性也相差很大,早期快速诊断和血清学检测就成为预防和控制禽流感的前提条件。大量研究证实，由于感染禽类的种别、龄期、性别、并发感染的病毒和环境因素的不同，疾病症状差异极大。所以，该病主要依靠实验室进行确诊。RT-PCR技术检测AIV，有灵敏、特异、快捷、多重PCR具有在一个体系中检测多个亚型等优势。
2. 研究的基本内容和问题
1. 研究目标
通过制备过程中影响检测质量的多因素进行分析和比较，找出每个AIV亚型最合适的三重RT-PCR引物，建立禽流感病毒H5、H7、H9亚型多重RT-PCR的最佳检测方法。建立起一套简单有效的检测方法，为该病的诊断与防治打下基础。
2. 研究内容
3. 研究的方法与方案
1. 研究方法及实验方案
1.1 禽流感H5、H7、H9病毒种毒尿囊膜接种9-10日龄SPF鸡胚，分别收集于24-40 h内死亡的鸡胚尿囊液。
1.2 根据GENBANK中查出的禽流感病毒H5亚型，禽流感病毒H7亚型、禽流感病毒H9亚型，的HA片段基因组序列，利用DNASTAR软件分别对AIV的H5、H7、H9亚型HA基因区域进行同源性比较，采用Primer Premier 5 软件设计筛选出3对多重PCR反应的特异性引物。
4. 研究创新点
本课题所建立的AIV的H5、H7、H9亚型多重RT-PCR，只需要进行一次多重PCR反应，就可同时检测出AVI的H5、H7、H9亚型，操作更方便、快捷，而且成本也降低了许多。
5. 研究计划与进展
2014.3.24至4.16进行预实验，查阅资料、了解相关知识、熟悉实验室环境、拟定实验计划、准备实验材料（中途参加考研复试）
2014.4.17至2014.5.17正式完成实验
2014.5.18至5.28完成毕业论文
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