1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
课题意义:
分泌片(secretorycomponent,SC)是粘膜型IgA(sIgA)的组成部分,对于粘膜免疫具有重要作用。本实验使用已构建好的含有目的基因的工程菌(BL21),在诱导剂(IPTG)作用下,诱使目的基因表达,分泌目的蛋白即分泌片。然后使用镍柱亲和层析,对SC进行初步纯化,获得粗提物。粗提物经透析、浓缩处理后,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)。根据目的蛋白分子量大小,切割含有SC的凝胶,进行胶回收,获得纯净的蛋白提取物。最后,对获得的蛋白进行Westernblot检测。
国内外研究概况:
2. 研究的基本内容和问题
研究目标、内容:
猪SIgAsIgA分泌片(secretorycomponent)的分离纯化
拟解决的关键问题:
3. 研究的方法与方案
研究方法、技术路线、实验方案:
材料与方法
1.1目的蛋白的诱导表达
1.1.1取6支高压过的试管,每支试管加5ml的含有重组质粒的大肠杆菌液和5μl100mg/ml氨苄青霉素(Amp );
4. 研究创新点
特色或创新之处:
与普通的抗体分子相比,SIgA具有许多优良特性。SIgA分子中的J链将2个IgA单体连接起来,由于每个IgA单体具有2个抗原结合部位,因此每个SIgA抗体即有4个抗原结合位点,从而比普通抗体分子具有更好的亲和力。SIgA具有很高的稳定性,其在粘膜表面的半衰期为IgG的3倍。这种稳定性主要是由以下几种因素所致:一是由于SIgA的铰链区较之其他抗体分子短,而铰链区是最容易受到蛋白酶攻击的部位,铰链区的缩短有利于抵抗蛋白酶的降解;二是由于SIgA的分泌片高度稳定性,其多糖侧脸具有防止蛋白酶降解的作用,分泌片对抗体文字的包裹使整改抗体分子变得十分稳定。此外,分泌片还赋予SIgA整齐地排列在粘膜表面,形成隔离保护层,可有效地阻止病毒的入侵。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展:
2014-3-11~2014-5-6:对蛋白进行纯化。
2014-5-6以后:对实验数据进行分析,撰写论文。
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