1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
猪链球菌病（Swine streptococcosis）是一种常见的猪传染病，世界各国均有发生，危害严重，也是一直困扰我国养猪业重要的细菌性传染病之一。
该病是链球菌属中多种链球菌引致猪的一种传染性疫病的总称，其临床上主要表现为败血症、脑膜炎、关节炎等[1-3]。
近年来，随着集约化养猪业的发展，该病在我国的流行又呈明显的上升趋势，特别是猪群发生蓝耳病、非典型性猪瘟等疫病后易继发该病，带来十分严重的经济损失[4-5]。
2. 研究的基本内容和问题
1研究目标 1.1以BABL/c小鼠为实验动物，通过用Percoll密度梯度离心法分离纯化的中性粒细胞进行一系列体外实验，研究马链球菌兽疫亚种FicSEZ蛋白对宿主中性粒细胞的细胞状态及功能等方面的影响，从而为后续研究FicSEZ蛋白在SEZ感染过程中对中性粒细胞的影响提供基础数据。
1.2激发本人主动学习的兴趣，培养自主创新的科研能力。
2研究内容2.1中性粒细胞的分离培养 以BABL/c小鼠为实验动物，眼球采血后用Percoll密度梯度离心法分离纯化出正常中性粒细胞；2.2 FicSEZ对中性粒细胞状态的影响 用FicSEZ基因表达蛋白感染分离纯化的正常中性粒细胞，观察FicSEZ蛋白对中性粒细胞的细胞状态的影响；2.3 FicSEZ对中性粒细胞炎性因子分泌的影响 用FicSEZ基因表达蛋白感染分离纯化的正常中性粒细胞，检测中性粒细胞中免疫相关因子（组胺、白细胞介素等），进一步研究FicSEZ蛋白对中性粒细胞功能的影响。
3. 研究的方法与方案
1研究方法 主要采用RT-PCR技术、荧光分光光度法、电子显微镜和激光共聚焦显微镜等研究方法。
2技术路线2.1Percoll密度梯度离心法分离纯化正常PMN； 2.2FicSEZ基因表达蛋白感染分离纯化的正常PMN；2.3电子显微镜及激光共聚焦显微镜观察PMN的细胞状态；2.4RT-PCR、荧光分光光度法等技术检测PMN中的关键因子变化，为后续研究FicSEZ蛋白在SEZ感染过程中对PMN的影响提供基础数据。
3实验方案3.1分离纯化正常中性粒细胞以BABL/c小鼠为实验动物，眼球采血后用Percoll密度梯度离心法分离纯化出正常中性粒细胞；3.2体外感染与培养用FicSEZ基因表达蛋白以10倍浓度梯度递增分别感染相同适宜浓度的正常中性粒细胞，于DMEM培养基中培养；3.3观察中性粒细胞的细胞状态在电子显微镜及激光共聚焦显微镜下观察被不同浓度的FicSEZ基因表达蛋白感染的中性粒细胞的细胞状态的变化，并进行拍照和记录；3.4检测关键因子的变化 检测被不同浓度的FicSEZ基因表达蛋白感染的中性粒细胞释放的关键因子的变化，如组胺、白细胞介素-2、白细胞介素-4、肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白三烯等。
4. 研究创新点
马链球菌兽疫亚种FicSEZ蛋白对宿主中性粒细胞的影响属创新性研究，国内外暂无人发表结论。
5. 研究计划与进展
2016.09-2016.10分离纯化BABL/c小鼠血液中正常的中性粒细胞。
2016.11-2017.01用FicSEZ基因表达蛋白感染正常中性粒细胞，通过电子显微镜及激光共聚焦显微镜观察中性粒细胞的细胞状态的变化。
用FicSEZ基因表达蛋白感染正常中性粒细胞，检测中性粒细胞释放的关键因子的变化，如组胺、白细胞介素-2、白细胞介素-4、肿瘤坏死因子α、干扰素γ、白三烯等。
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