猪气喘病抗性基因IFNGR1的鉴定分析开题报告

 2023-02-11 12:59:24

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

由细菌、病毒等病原微生物引起的动物传染性疾病不仅对养殖业的发展造成不利影响,也给人类健康带来了巨大的隐患。猪支原体肺炎(Mycoplasmal pneumoniaof swine, MPS),俗称猪气喘病,地方流行性肺炎,是由猪肺炎支原体(Mycoplasma hyopneumoniae, Mhp)引起的猪的一种高发病率,低死亡率的呼吸道传染病。该病会引起猪的生长受阻,饲料转化率下降15.9%,且流行性广,净化难,增加了养猪的成本,造成经济效益的下降[1]。目前,防治猪MPS的方法主要有加强饲养管理,定期检疫和疫苗药物。但疫苗药物防治的同时,会存在药物残留等,造成食品安全问题。所以,提高猪自身免疫力和抗病能力,是当前亟待解决的问题。

IFNGR 属于Ⅱ型细胞因子受体,由两条链组成:IFNGR1 及 IFNGR2,该受体几乎在所有细胞中均有表达[2]。IFNGR1 也叫 CD119 或 IFNγRα,是 IFN-γR 的 α 链,与 IFN-γ 二聚体高亲和力结合。干扰素(Interferon,IFN)于1957年发现,目前发现有三型IFN:I型、II型和III型。INF-γ属于II型IFN。大量研究表明,IFN-γ除具有光谱抗病毒,调节细胞生长和分化功能外,还能够呈递抗原,对抗肿瘤、调节免疫系统起着关键的作用[3][4]。IFN-γ在临床上治疗肿瘤方面具有显著的效果,但在治疗肺部疾病仍存在分歧。在动物疾病研究中,IFN-γ对疾病治疗具有重要作用,尤其是对猪肺部疾病的免疫作用。IFN-γ可有效抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪口蹄疫病毒(FMDV)和非洲猪瘟病毒(ASFV)的繁殖,同时对免疫抑制猪具有良好免疫调节作用[5][6]。研究发现IFN-γ必须与其存在于靶细胞上的特异性受体相结合才能发挥相应的生物学功能,并且作用的范围和生物学效应,取决于IFN-γ受体(IFNGR)的表达和分布[7]。因此,IFNGR1在IFN-γ发挥其相应的生物学功能方面具有极其重要的作用。

目前,关于IFNGR1基因的研究多在临床治疗疾病方面,并发现IFNGR1基因在疾病抗性方面起着重要的作用。He等人也证明IFNGR1基因多态性与人类肺结核相关[8][9][10]。最新研究发现某些IFNGR基因的遗传变异与结核病的发展有关[11]。Tang Q等报道了IFNGR基因在外周血单核细胞中表达量与风湿性关节炎有重要的影响[12]。May Korachi等发现可用IFNGR-1(-56,-611)作为候选基因标记来确定病人对慢性乙型肝炎的发展[13]。截至目前,畜禽IFNGR1基因的研究相对较少,我们对猪IFNGR1基因对气喘病的影响也知之甚少。

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2. 研究的基本内容和问题

1、研究目标

在苏淮猪肺炎支原体感染表达基因mRNA测序结果的基础上,筛选出了IFNGR1作为MPS抗性候选基因,进一步寻找和鉴定IFNGR1基因中的功能突变位点,并与苏淮猪肺炎支原体表达量性状进行相关分析,验证其在抗气喘病感染中的关键作用。

2、研究内容

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3. 研究的方法与方案

1、研究方法

本实验基于RNA-seq测序结果和数据处理与分析等技术,筛选出差异表达基因,从中选出效应显著的候选关键基因IFNGR1。对IFNGR1基因外显子区域进行PCR扩增,得到苏淮猪和长白猪两猪种的IFNGR1基因全部外显子片段,利用PCR产物直接测序,获得基因序列,对比并筛查到IFNGR1的功能SNP位点,利用PCR产物直接测序技术对苏淮猪群体进行SNP基因分型。

2、技术路线

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4. 研究创新点

基于高通量测序平台RNA-seq技术对Mhp感染猪和未感染猪支气管进行转录组测序分析的结果,筛选出猪支气管上Mhp抗性关键基因,为标记辅助选择培育Mps抗性的苏淮猪提供理论依据。

5. 研究计划与进展

2015.10~2015.11:差异表达基因筛选,挖掘出Mhp抗性候选基因IFNGR1

2015.11~2016.03:鉴定苏淮猪支气管上Mhp抗性基因IFNGR1,寻找功能SNP位点及其与感染量的相关分析。

2016.04~2016.05:整理数据,撰写论文,完成结题工作,进行毕业答辩。
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