1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
研究意义远缘物种基因组DNA导入会导致宿主产生突变,这是一个广泛报道的现象[1]。
利用远缘物种创新种质是植物遗传育种的一个方向,中国有很多研究者通过这种方法育成了一些植物新品种[2]。
在动物方面,鱼类也有此类报道,比如为了研究中国明对虾总DNA直接导入鲤鱼体内后,对鲤鱼肌肉成分的影响,研究人员依靠显微介导远缘杂交技术,将远缘基因导入到鲤鱼的受精卵,并获得了子代,对子代进行AFLP检测,均扩增出了供体基因片段[3]。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标(1)斑马鱼突变体基因组DNA提取(2)导入序列扩增(3)显微注射(4)序列比对研究内容(1)斑马鱼突变体基因组DNA提取:取突变体的肌肉组织,加入裂解液孵育 (2)导入序列扩增:利用引物 Gmprimer2(5 μM,ccaaacacatgaagccgaatt)进行扩增。
(3)显微注射:将DNA稀释成不同浓度,分别显微注入斑马鱼受精卵(4)序列比对:观察不同的个体得到的序列差异拟解决的关键问题 (1)总DNA的提取(2)选择合适的引物和反应体系进行扩增
3. 研究的方法与方案
研究方法 (1)细胞裂解液孵育(2)PCR (3)注射技术(4)序列比对实验方案一、突变体基因组DNA提取斑马鱼饲养3个月后,选择外形发生变化的个体。
取0.1g突变体肌肉组织,加入500μL裂解液孵育(裂解液含 5 μl蛋白酶 K),55℃ ,4 小时。
待裂解完全后,加入3 μL RNase A(10 mg/ml),37 ℃ 30 min。
4. 研究创新点
项目特色本实验可以更好的了解导入的基因序列调控斑马鱼发育的作用机制,为接下来研究做好铺垫。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展(1)2017年9月:查阅相关文献以及前期准备(2)2017年9月2017年12月:显微注射致变序列并观察结果(3)2018年1月2018年3月:实验数据分析整理(4)2017年4月2017年5月:成果汇总、论文撰写
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