1. 研究目的与意义
内容:
1.介绍了脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF),这是脑内合成的一种蛋白质。
2.BDNF对于多种疾病有治疗作用,例如抑郁症,帕金森,糖尿病,老年痴呆症等。
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2. 文献综述
详情见附件
3. 设计方案和技术路线
1.研究方案:通过37℃和30℃摇瓶培养BDNF大肠杆菌,诱导OD6-8左右。首先制备平板及种子培养基,然后进行菌落的接种,培养。摇瓶培养后进行大肠杆菌的诱导表达,测OD600,当OD600在6-8时,留样23个,发酵罐中加入4mlIPTG母液,诱导4h,收瓶留样4个。发酵液在离心机(4200rpm,20min)离心去上清,沉淀收集并称重,标识清楚,-20℃暂存。④检定:沉淀用SDS-PAGE还原电泳检测和蛋白含量检定两种方法检定含蛋量。
2.技术路线详情见附件
4. 工作计划
1.2022年2月15日到2月28日理解论文题目BDNF的发酵工艺研究的内涵,初步拟定查阅文献的计划;
2.2022年3月1日到3月9日查阅文献,完成开题报告,文献综述;
3.2022年3月10日到3月20日熟悉论文涉及到的知识,阅读相关资料掌握论文的写作方法;
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5. 难点与创新点
特色:通过把BDNF克隆于大肠杆菌中表达,大肠杆菌培养条件简单,生长速度很快,通过基因工程技术可以把BDNF基因克隆于大肠杆菌体内,通过发酵技术进行大量提取,质量得到保证且价格低廉。
创新:天然的BDNF是从猪脑等动物大脑中提取的,但提取困难,成本高,且提取的天然BDNF蛋白十分稀少。随着生物技术的发展,目前利用基因工程技术,可以快速获得大量BDNF蛋白。这种方法旨在快速,简便,可以大量获得BDNF蛋白,同时也降低了原料成本。
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