1. 研究目的与意义
内容:①整理睫状神经营养因子(CNTF)的文献
②对CNTF进行菌种培养、诱导、收样、送检、筛选。
③控制单变量,研究温度、PH、诱导温度、诱导时间、培养基的种类对摇瓶的影响
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2. 文献综述
睫状神经营养因子的应用
顾 薇 薇
摘 要:目的:了解睫状神经营养因子(CNTF)的来源、分布,目前在多个领域的应用,以及未来的发展前景。方法:对近年来国内有关睫状神经营养因子的文献进行归纳总结,并对它的菌种筛选和摇瓶工艺进行探究。
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3. 设计方案和技术路线
研究方案:菌种筛选:划线:挑选8颗单菌落,摇瓶验证表达水平(单颗转LB,37℃过夜培养后,转LB25℃培养、诱导); LB液体培养基种子培养OD600达到0.8~1.0后,加入IPTG至终浓度1 mM诱导表达,3h后取样离心,送检SDS-PAGE。
摇瓶工艺:CNTF菌接种于一定的培养基中,过夜培养,接种于培养基中,培养至一定的OD值时,IPTG诱导,诱导一定时间后结束培养,离心后取沉淀,沉淀送检电泳分析目的蛋白纯度来确定最佳培养基、温度、PH、诱导时间、诱导浓度。
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4. 工作计划
2022.01~2022.03 文献查阅、研究设计方案
2022.03~2022.05 CNTF的菌种筛选和摇瓶工艺的优化实验
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5. 难点与创新点
睫状神经营养因子(CNTF)是一种分子量为20KD的碱性蛋白,由199个氨基酸组成;其N末端不具有分泌蛋白所特有的信号肽。促进交感、副交感和感觉神经元的生长,作用甚至涉及神经胶质细胞,并能防止神经损伤,促进神经纤维再生及支持细胞类型的分化。可用于神经系统的防治。而关于CNTF 的发酵工艺的研究较少,本研究通过菌种的筛选和摇瓶工艺条件的优化研究,希望对CNTF的发酵工艺提供实验依据。
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