甘草黄酮的酶法糖基化开题报告

 2023-04-13 09:30:30

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

文 献 综 述1.1背景介绍甘草属豆科植物,长期以来被广泛应用于中、西医临床疾病治疗,具有极高的药用价值[1]。

研究表明,甘草提取物具有抗炎、抗氧化、抗菌、抗病毒、抗癌、抗抑郁、保护肝脏等多重药理作用[2-7]。

甘草的化学成分主要包括黄酮类、皂苷类、生物碱、氨基酸类、香豆素类、多糖类等,其中又以黄酮类和皂苷类为主。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

2.1研究内容本课题主要采用基因工程手段,利用所选择的糖基转移酶序列导入大肠杆菌构建工程菌,对甘草来源的黄酮类物质进行生物转化实验,通过对产物的分离纯化和鉴定验证糖基转移酶对不同底物的选择性、转化率等酶学特性,挖掘其作为生物催化剂的潜力。

1) 对所选取的糖基转移酶进行表达纯化和酶学性质表征;2) 通过对甘草黄酮进行生物转化实验验证酶的活性和选择性;3) 对所选取糖基转移酶催化糖基化反应应用进行初步探究。

2.2研究手段1) 选择具有良好应用潜力的糖基转移酶序列,对其进行工程菌构建;2) 甘油菌活化、质粒提取、核酸胶验证;3) 重组质粒转化进DH5α和BL21(DE3),重组菌摇瓶培养,诱导表达,菌体收集与破碎; 4) 制备粗酶液、蛋白浓度测定、SDS-PAGE验证酶学性质;5) 获得重组酶对甘草黄酮进行生物转化实验,并对产物进行初步检测。

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