1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
课题意义:建立一种不依赖于组织培养、可以稳定、高效、适合于规模化操作的农杆菌转化水稻的新方法。
并通过相应方法得到转GhMAC3基因水稻植株,收获种子,经筛选和分子检测,获得转基因植株。
国内外研究状况:水稻( Orazy sativa L.) 是我国乃至世界上最重要的粮食作物之一,世界上近 1/2 的人口,包括几乎整个东亚和东南亚的人口,都以稻米为主食[1]近年来,随着世界人口增加、耕地减少,生物与非生物因素胁迫日益严重的情况下,水稻生产面临巨大挑战[2]。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标:获得转GhMAC3易位表达的转基因水稻株系内容:1农杆菌转化液的制备2水稻转基因植株的获得3 T0代转基因水稻种子抗性的筛选4 水稻DNA的提取、转基因水稻的目的基因的PCR鉴定、Hpt基因的PCR鉴定拟解决的关键问题:确定进行转基因的农杆菌适宜浓度,以提高转化效率。
农杆菌转化液对花粉处理的方法
3. 研究的方法与方案
研究方法:1农杆菌转化液的制备将含有目的载体的农杆菌以1:100接菌于LB(含Rif 25 ug/mL和kan 50 ug/mL)液体培养基中,28 ℃、230 rpm/h悬浮培养16 h,再以1:100转接于新鲜LB培养液,同样条件培养12 h至OD600达到2.0。
经离心收集菌体后,倒掉上清,加入2.5倍体积的纯水,重悬至OD600为0.8,再加入0.1%的SiLvetL-77,得到农杆菌转化液,备用于转化水稻。
2水稻转基因植株的获得(1)花蕾选择:选择植株健壮、长势良好、无病虫害、并处于开花期的水稻花序为转化受体,剪除花序上下两端尚未开放的花蕾和已开败的花朵。
4. 研究创新点
特色创新之处:1.将棉花的基因转入水稻中,可以得到抗旱的水稻2.建立一种不依赖于组织培养、可以稳定、高效、适合于规模化操作的农杆菌转化水稻的新方法
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展:1、2015.062015.10农杆菌转化液的制备、及水稻转基因植株的获得2、2016.01T0代转基因水稻种子抗性的筛选3、2016.03水稻DNA的提取、转基因水稻的目的基因的PCR鉴定及 Hpt基因的PCR鉴定4、2016.04论文撰写
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