1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
木质化(lignification)是木质素形成并沉积在细胞壁上的结果。
在自然生长条件下,植物茎、叶等器官或组织的木质化程度伴随着植物的生长、发育而不断提高。
木质化对植物的生长、发育、抗病及环境适应性方面有重要的生理意义(Boerjan et.,2003),但木质化对一些果蔬,如梨(Tao et., 2009)、枇杷(郑永华等,2004)、山竹(Dangcham et.,2008)、竹笋(席玙芳和罗自生,2000)和菜豆(Smith et.,1994)等的品质产生不利影响。
2. 研究的基本内容和问题
【研究目标】本项目以砀山酥梨为实验材料,选择树势健壮、管理水平一致的果树,于盛花期后15天开始以一定的时间间隔采样,研究整个果实生长期砀山酥梨果肉细胞中H2O2及木质素含量的变化,探究木质素与石细胞的相互关系以及活性氧对程序性死亡的诱导作用。
同时找到调控果肉细胞程序性死亡的基因,探究其功能并进行克隆。
可望为梨果品质形成调控技术的研发提供理论依据和可能的技术方法。
3. 研究的方法与方案
【研究方法】项目利用分子生物学、细胞生物学等研究技术,从细胞超微结构、基因克隆等层次研究PCD与梨果实石细胞形成的关系。
并掌握基因提取、克隆和分析方法。
【技术路线】以砀山酥梨为试材,盛花期后15d开始每7d取样一次,测定每一时期果肉细胞的生理指标(H2O2、木质素、石细胞),分析数据找到木质素与石细胞PCD之间可能存在的关系,并探索调控细胞死亡的基因并进行克隆【实验方案与可行性分析】1、实验材料试验材料为砀山酥梨,选择树势健壮,管理水平一致的果树,于盛花后15d开始每7d左右取有代表性的果实作为样本,果实发育前期间隔天数较短,可做适当调整。
4. 研究创新点
特色或创新之处本项目利用分子生物学、细胞生物学技术,从细胞超微结构、基因克隆等层次研究PCD与梨果实石细胞形成的关系,可望为梨果品质形成调控技术的研发提供理论依据和可能的技术方法,具有较强的理论意义和应用前景
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展2016年4月~5月:完成前期准备工作,包括资料查询,文献综述写作,实验设计,材料准备等;2016年5月~7月:测定梨果肉细胞中石细胞、木质素、过氧化氢含量;2016年9月~10月:梨果肉组织石蜡切片制备及染色,并观察石细胞团密度和大小;2016年11月~2016年12月:对比另外四种蔷薇科五种的基因序列,筛选梨果肉细胞中的Metacaspase酶基因,并提取RNA;2017年1月~2月:选择表达量较高的基因完成克隆;2017年3月~4月:进行统计分析和研究论文的撰写。
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