稻瘟病菌MoRgs3互作蛋白的筛选与功能研究开题报告

 2023-02-19 20:17:57

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

意义:稻瘟病菌可以引起水稻上的重要病害—稻瘟病。因此,开辟防治稻瘟病的新途径,是目前研究该病的热门课题,稻瘟菌致病相关基因的克隆和功能鉴定,了解稻瘟病菌的致病分子机理不仅对防治稻瘟病具有重要的意义,而且它作为一个理想的研究体系对了解其他植物病原真菌与寄主的相互作用也有重要的意义。

国内外研究概况:稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)引发的稻瘟病是水稻上的最重要病害之一,在全世界稻区均有发生,严重威胁世界的粮食安全。在我国,水稻作为主要的粮食作物,同样遭受稻瘟病的严重挑战。目前,防治稻瘟病主要以选育和利用抗病品种为主,以化学农药防治为辅,但由于该病原菌小种易变,抗病品种在种植几年后便失去了其利用价值。因此,防治稻瘟病始终是水稻生产上的难题,而控制该病害的基础是了解其在生长发育及致病过程中的调控机制。水稻和稻瘟病菌全基因组序列测序的完成推进了稻瘟病菌的致病基因相关研究进程,同时也为从基因组水平上认识稻瘟病菌致病分子机理提供了崭新平台。

生物体感受外界信号后,通过异三聚体G蛋白激活依赖于cAMP的信号途径,将信号整合到胞内信号途径中,最终对外界信号做出应答反应。cAMP是生物体内普遍存在的感受外界激素和营养信号的第二信使,其浓度主要受腺苷酸环化酶催化的生物合成和磷酸二酯酶催化的水解控制。生物体收到外界刺激后,胞内cAMP浓度升高,激活依赖于cAMP的蛋白激酶A,并激活下游信号,使生物体对外界信号的刺激做出应答反应。

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2. 研究的基本内容和问题

目标:稻瘟病菌是水稻生产上最具破坏性的病原菌之一,每年给全球的水稻生产都带来巨大损失。长期以来,人们一直在寻求有效治理该病害的措施。近年来,稻瘟病菌全基因组数据的公布加速了致病相关基因的挖掘及其致病分子机制的解析,同时也使其逐渐成为研究植物病原菌与寄主互作的理想模式材料。

内容:(1)运用酵母筛库筛选出MoRgs3蛋白的互作蛋白;

(2)用酵母双杂交、免疫共沉淀(CoIP)、GST-Pull down、双分子荧光互补(BiFC)等技术验证所筛选出的蛋白与MoRGS3蛋白是否存在相互作用关系。

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3. 研究的方法与方案

研究方法:文献研究法

实验研究法

(1)酵母双杂交筛选出与MoRgs3的互作蛋白;

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4. 研究创新点

1.立意新.从全基因组范围鉴定致病因子MoRgs3的结合蛋白,并对其生物学功能进行深入分析。研究结果对解释稻瘟病菌与致病相关的分子机制具有重要帮助,对寻找控制稻瘟病菌的新的农药靶标位点具有重要的指导价值

2.实验方案设计新.采用Pull-Down技术筛选MoRgs3的结合蛋白;利用质谱分析结合蛋白序列,直接从全基因组数据库中鉴定其对应的编码基因。

5. 研究计划与进展

2018年6月—2018年12月1)构建融合表达载体;2)转化稻瘟病菌Guy11菌株,筛选获得转化子;3)提取转化子总蛋白;4)洗脱蛋白,进行质谱测序;5)对蛋白进行种类分析,选取感兴趣的基因进行功能分析

2018年12月—2019年4月1)构建候选基因的敲除载体2)转化Guy11菌株的原生质体,获得敲除突变体3)分析突变体的生物学表型4)整理总结报告

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