1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
研究意义：
梨锈水病是我国梨树上危害严重的一种细菌性病害，最早在江苏徐淮地区发现，近年江苏、浙江、山东等省均有梨锈水的报道。该病多发生在7-12年生初结果的幼梨树上，危害性很大，如防治不及时可造成全株死亡。基于生物学和分子生物学分析，确定了梨锈水病的病原物为Dickeya fangzhongdai。据文献记载，此病主要为害梨树的骨干枝，病害发展迅速，为害性大。发病初期树皮外表无明显病斑，从皮孔、叶痕、伤口等处渗出锈色水珠或有锈水突然渗出，用刀削开皮层，才可见皮层呈淡红色并有褐色小斑或血丝状条纹，腐皮松软充水，有酒糟味，内含大量细菌。发病后期从孔口渗出大量液体，颜色由最初的无色，2～3小时内变为乳白色、红褐色，最后呈铁锈色，具粘性。部分病枝因皮层腐烂树木迅速枯死。锈水不多的轻病枝，枯死慢或不枯死，树叶变红早落，树势大减。目前，除本研究室对该病害进行病原学研究之外，未见梨锈水病的病原和发病机制的研究报道，其 hrp（hypersensitive reaction and pathogenicity） 基因簇已成为国内外研究热点，明确 hrp 基因簇中hrcJ基因在致病过程中的作用，对于解析病原菌Ⅲ型分泌系统各基因的功能、深入了解该病菌致病性机理、寻找和开发新型药物靶标及制定病害防控策略，具有重要的理论和实际意义。
国内外研究概况：
2. 研究的基本内容和问题
研究目标：
为明确 D. fangzhongdai JS-5的 hrcJ 基因在致病过程中的作用，本研究利用同源重组原理，构建了D.fangzhongdai JS-5的 hrcJ 基因缺失突变体。通过比较野生型菌株与 hrcJ 基因缺失突变体菌株致病相关表型，阐释其功能，可为揭示病原菌 Ⅲ 型分泌系统各基因的功能，阐明病原菌的致病机制提供理论依据。
3. 研究的方法与方案
研究方法：
1.总DNA提取
从-40℃取出 D.fangzhongdai 野生型菌株 JS-5 划线接种于添加利福平的 LB 平板上，28℃恒温箱培养12-24 h，再挑取单菌落接种于 25 mL LB 液体培养基中，28℃，220 r/min 振荡培养至对数生长期，用 TIANGEN细菌基因组 DNA 提取试剂盒进行基因组 DNA 的提取，提取的基因组 DNA 保存于-20℃备用。参照试剂盒说明书，基因组提取的具体操作步骤参考如下：
4. 研究创新点
目前，除本实验室对梨锈水进行病原学研究之外，未见梨锈水病的病原和发病机制的研究报道；在病原细菌与寄主植物互作中，由hrp基因簇编码的T3SS 在致病性中起关键决定作用，明确 hrp 基因簇中hrcJ基因在致病过程中的作用，便于深入了解该病菌致病性机理。
5. 研究计划与进展
研究计划：
2018年10月：做好实验的前期准备工作
2018年11月：查阅相关资料，进行实验设计，观摩并学习相关实验方法
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