枯草芽孢杆菌Bs916中yfiN基因的突变和功能初步研究开题报告

 2023-02-20 09:49:43

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

在植物病害防治策略中,目前较为成熟的手段是化学农药防治,但农民对于农药的施用剂量、方法等问题存在很多的误解和盲区,农药的滥用导致了严重的污染问题,在生物体内富集,最终危害着人体的健康。同时目前农药造成病原物的抗药性和耐药性问题日渐严峻,对于新靶标的发现和新品种的农药的研发和生产有很大的要求。

随着人们对病害原因中主观环境因素作用认识的深入,人们反思化学防治所带来的生态破坏、环境污染和残留、抗药性等问题,总结经验教训,极力发展新的防治途径,生物防治因此逐渐被人们所重视。生防微生物防治植物病害的相关研究可追溯至上世纪20年代,在对植物病害生防微生物的研究中,国内外应用研究较多的是芽孢杆菌属(Bacillus),它广泛分布于自然界中。根围拮抗芽孢杆菌因其抑菌谱广、对多种植物病害具较好防效,促生效果明显而被广泛深入研究。芽孢杆菌产生的低分子抗生素以及蛋白或多肽类化合物抗菌活性物质对许多危害严重的植物病原真菌都表现出很强的抑菌活性,且因其内生芽孢,抗逆性强,繁殖速度快,有利于工业化生产。芽孢杆菌还具有保湿性强,抑菌、灭害力强,除臭,有机质分解力强和产生丰富的代谢生成物的功能。目前用于生物防治的芽孢杆菌种类包括:枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和多粘芽孢杆菌等。实验研究证明芽孢杆菌在抗逆稳定性方面和防治效果方面显著优于其他的非芽孢杆菌的生防菌。

芽孢杆菌作为一类革兰氏阳性菌,具有相对高效的分泌能力、研究深入的遗传背景和简易的发酵培养条件等众多优势。其发酵产物如枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素和脂肽类化合物,在农业领域上有着拮抗植物病原菌、提高作物抗性等诸多作用,且对于人体无毒无害,故研究枯草芽孢杆菌的遗传功能并推动其应用于农业生产上有极大的现实意义。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:明确基因yfiN对AHLs的降解的作用

研究内容:

1. 分析yfiN基因的序列同源性,通过PCR扩增基因,T/A克隆该基因片段。

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3. 研究的方法与方案

研究方法

1.菌种活化 :

将冰箱保存的芽孢杆菌菌种或大肠杆菌转接到LB液体培养基中,37度200r摇床恒温培养15h。

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4. 研究创新点

AHLs影响着病原群的QS反应,同时与病原菌的生物膜、增殖等相关,间接也影响着病原菌的致病能力。通过研究yfiN基因对于AHLs的降解作用,丰富芽孢杆菌生防的新机制。

5. 研究计划与进展

1. 2019年9月:分析yfiN基因的序列同源性,通过PCR扩增基因,T/A克隆该基因片段。

2. 2019年10月:构建芽孢杆菌突变载体yfiN基因的突变载体。

3. 2019年11月:构建芽孢杆菌yfiN基因的突变体,并进行验证保存。

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